Avaliação imunológica dos camundongos geneticamente selecionados para diferente capacidade de produção de anticorpo

INTRODUCTION: The potentiality of the inflammatory response or the specific immune response of the individual are complex characteristics that vary continuously and have a normal distribution in a heterogeneous population, since they are under polygenic control. Aiming at the study of the genetic regulation of specific immunity, our laboratory developed strains of heterogeneous mice genetically selected for high – HIII and low – LIII ability to produce antibodies to certain antigens through the process of genetic selection bidirectional. For some genetic and immunological studies, isogenic mice must be used. Therefore, we produced isogenic trunks of these parental lines in the vivarium of the Immunogenetics laboratory of the Butantan Institute, which after the selection process were subjected to inbreeding. OBJECTIVE: Evaluate the ability to produce antibodies as well as cells – B and T lymphocytes (CD4 and CD8) after stimulating the immune system with diphtheria anatoxin, comparing isogenic trunks with parental lineages. METHODOLOGY: Isogenic mice from Stem A (High) and Stem E (Low) and heterogeneous (HIII and LIII) were immunized with diphtheria anatoxin. The primary and secondary humoral immune response was evaluated in serum by quantifying the production of anti-diphtheria IgG antibodies using the ELISA technique. For the characterization of the T and B lymphocyte cell response profile, the spleen and lymph nodes were collected and the cells were identified by surface markers (CD4, CD8, B220) and evaluated by flow cytometry. RESULTS: The results show significant increases in the concentration of antibodies produced by the groups when comparing normal serum with primary and secondary responses. The production of antibodies in the secondary response was higher in animals from the HIII and Stem A strains compared to the other groups. In the cellular response, a significant increase in T lymphocytes (CD4+and CD8+) and B lymphocytes was seen in the lymph node in the experimental HIII group compared to the other groups, however in the spleen a significantly increased T cell response was detected in the immunized animals in the LIII group. Regarding the isogenic trunks, the animals from Stem A showed an increase in CD4+ T lymphocytes when compared to the experimental Stem E in splenic cells. CONCLUSIONS: Animals selected for high antibody production capacity showed greater responses both in IgG secretion in the secondary response and in the higher frequency of T and B cells in the lymph nodes. It is important to in-depth study of the modulation mechanism of the immune response in these strains to understand the multi-specific genetic effects against certain antigens.

INTRODUÇÃO: A potencialidade da resposta inflamatória ou da resposta imune específica do indivíduo são características complexas que variam de forma contínua e têm uma distribuição normal numa população heterogênea, pois estão sob controle poligênico. Visando o estudo da regulação genética da imunidade específica nosso laboratório desenvolveu linhagens de camundongos heterogênicos geneticamente selecionadas para alta (“High” - HIII) e baixa (“Low” - LIII) capacidade de produção de anticorpos a certos antígenos através do processo de seleção genética bidirecional. Para alguns estudos genéticos e imunológicos devem ser utilizados camundongos isogênicos, assim, produzimos no Biotério do laboratório de Imunogenética do Instituto Butantan troncos isogênicos destas linhagens parentais, que após o processo seletivo foram submetidas a cruzamentos consanguíneos. OBJETIVO: Avaliar a capacidade de produção de anticorpos assim como as células – linfócitos B e T (CD4+ e CD8+) após o estímulo do sistema imune com anatoxina diftérica comparando os troncos isogênicos com as linhagens parentais. METODOLOGIA: Camundongos isogênicos (High – Tronco A e Low – Tronco E) e heterogênicos (HIII e LIII) foram imunizados com anatoxina diftérica. A resposta imune humoral primária e secundária foram avaliadas no soro pela quantificação da produção de anticorpos IgG antidiftéricos através da técnica de ELISA. Para a caracterização do perfil de resposta celular de linfócitos T e B, foram coletados o baço e linfonodos e as células foram identificadas por marcadores de superfície (CD4, CD8, B220) e avaliadas por citometria de fluxo. RESULTADOS: Os resultados mostram aumentos significativos na concentração de anticorpos produzidos pelos grupos quando comparadas o soro normal com as respostas primária e secundária. A produção de anticorpos na resposta secundária foi maior nos animais das linhagens HIII e Tronco A em relação aos outros grupos. Na resposta celular foi visualizado no linfonodo um aumento significante de linfócitos T (CD4+e CD8+) e linfócitos B no grupo HIII experimental em relação aos outros grupos, entretanto no baço a resposta significativamente aumentada das células T foi detectada nos animais imunizados do grupo LIII. Em relação aos troncos isogênicos, os animais do Tronco A apresentaram um aumento de linfócitos T CD4+ quando comparados ao Tronco E experimental nas células esplênicas. CONCLUSÕES: Os animais selecionados para alta capacidade de produção de anticorpos apresentaram respostas maiores tanto na secreção de IgG na resposta secundária como na maior frequência de células T e B nos linfonodos. Sendo importante o estudo aprofundado do mecanismo de modulação da resposta imune nessas linhagens para entendimento de efeitos genéticos multiespecíficos frente a determinados antígenos.

Enriquecimento ambiental com aveia em camundongos Swiss

Today we can say that it is almost impossible to think of research without animal models, and the most iconic model used since the mid-17th century is the House Mouse (Mus musculus), whose ancestor originated in Central Asia. (ANDRADE, 2002; KO and LUCA, 2009). The experiment was carried out with animals with stereotyped behaviors characteristic of stress such as aggressiveness, repetitive movements and gnawing the bars, the animals were organized into 4 groups, each of which had 3 subgroups, of which each group was offered environmental enrichments of the type foodstuffs, made with an oat- based mixture in two textures. The evaluation was carried out during 45 days, in 6 weighings, the data obtained were analyzed in the GraphPad Prism 9 program, which allows the statistical and variance evaluation, in addition to the construction of graphs. We concluded that despite the enrichments being different from each other, there was no significant change in weight gain between them, but there were distinct behavioral changes between each group and each subgroup.

Hoje podemos dizer que é quase impossível pensar em pesquisa sem modelos animais, e o modelo mais icônico utilizado desde meados do século XVIII é o Camundongo Doméstico (Mus musculus), tem como antepassado com origem na Ásia central.(ANDRADE, 2002; KO e LUCA, 2009) O experimento foi realizado com animais com comportamentos estereotipados característicos do estresse como agressividade, movimentos repetitivos e roer as grades, os animais foram organizados em 4 grupos, destes, cada um possuía 3 subgrupos, dos quais, foi ofertado a cada grupo enriquecimentos ambientais do tipo alimentar, feitos com mistura a base de aveia em duas texturas. A avaliação foi feita durante 45 dias, em 6 pesagens, os dados obtidos foram analisados no programa GraphPad Prism 9, que possibilita a avaliação estatística e de variância, além da construção de gráficos. Concluímos que apesar dos enriquecimentos serem distintos entre si não ocorreu mudança significativa no ganho de peso entre eles, mas sim ocorreu mudanças comportamentais distintas entre cada grupo e cada subgrupo.

Obtenção da Bothropstoxina-I do veneno de Bothrops jararacussu para estudo do processo inflamatório em camundongos AIRMax e AIRMin

Around 70% of the ophidian accidents reported in Brazil (2021) are from Bothrops genus snakebites. Intense inflammatory reaction in the local tissue with, in severe cases of bothropic envenomation, dysfunction of affected organ. Bothropstoxin-I (BthTX-I), isolated from Bothrops jararacussu venom, is a phospholipase A2 (PLA2) involved in inflammatory process and tissue damage. Cooperation between tissue components and immune cells, such as the macrophage, is critical for the repair of the injured site. The inflammatory response is initiated by detecting signs of acute tissue damage due the disturbance in the homeostasis (DAMPs) and/or by recognition of pathogen-associated molecular patterns (PAMPs). Several receptors are involved in the detection of PAMPs and DAMPs, and among them are the inflammasome. Therefore, it has been reported that the inflammasome participates in the induction and resolution of inflammatory response induced by different microbial antigens and/or those. Mice genetically selected for maximum (AIRmax) and minimum (AIRmin) acute inflammatory response to the Biogel, have been useful for the studies of the mechanisms involved in the inflammatory response. Therefore, our focus is to evaluate the inflammatory process induced by BthTX-I in AIRmax and AIRmin mice. Therefore, the BthTX-I was obtained from the B.jararacussu venom in quantity and purity for the next experiments. Furthermore, the BthTX-I was able to induce myotoxicity in AIRMax and AIRMin mice, which will allow the development of next experiments and studies to contribute for the understanding the mechanisms involved in the inflammatory process.

Cerca de 70 % dos acidentes ofídicos relatados no Brasil, em 2021, são resultantes de picadas de serpentes do gênero Bothrops. Intensa reação inflamatória é observada na lesão tecidual com relatos de disfunção do órgão afetado em casos graves de envenenamento botrópico. Bothropstoxina-I (BthTX-I), isolada do veneno de Bothrops jararacussu, é uma fosfolipase A2 (FLA2) envolvida no processo inflamatório e lesão local. A cooperação entre componentes teciduais e células imunes, como o macrófago, é fundamental para o reparo do local lesionado. A resposta inflamatória é iniciada por meio da detecção de sinais resultantes do dano tecidual devido à quebra da homeostasia (DAMPs) e/ou por reconhecimento de padrões moleculares associados aos patógenos (PAMPs). Diversos receptores estão envolvidos na detecção de PAMPs e DAMPs e, dentre eles estão os inflamassomas. Portanto, têm sido demonstrada a participação do inflamassoma na indução e regulação da resposta inflamatória induzida por antígenos microbianos e/sinais de danos teciduais. Camundongos geneticamente selecionados para máxima (AIRmax) e mínima (AIRmin) resposta inflamatória aguda ao Biogel, têm sido utilizados como modelo experimental para o estudo dos mecanismos envolvidos na resposta inflamatória. Isto posto, temos como foco avaliar a ação da BthTX-I sobre o processo inflamatório em camundongos AIRmax e AIRmin. Portanto, a BthTX-I foi obtida a partir do veneno de B. jararacussu em quantidade e pureza para a realização dos experimentos. Além disso, a BthTX-I purificada foi capaz de induzir atividade miotóxica em camundongos AIRMax e AIRMin, o que permitirá o desenvolvimento de novos estudos e experimentos sobre os fatores/mecanismos que medeiam a resposta inflamatória.

Pesquisa de polimorfismos de genes da via de ativação do AhR em camundongos suscetíveis e resistentes à artrite experimental

INTRODUÇÃO: A Artrite Reumatoide (RA), doença inflamatória crônica autoimune cujos eventos autoimunes primordiais não são totalmente conhecidos, envolve em sua suscetibilidade tanto um elemento genético quanto fatores ambientais. Um deles, a microbiota intestinal, pode modular significativamente o sistema imunológico através de produtos do metabolismo microbiano, muitos dos quais são ligantes do receptor de aril-hidrocarbonetos (AhR). O AhR é ativado por diversos ligantes, exógenos ou endógenos, os quais ativam programas transcricionais específicos, sendo uma ponte entre estímulos ambientais e fisiologia, e situando-se na multifatoriedade da Artrite Reumatoide. A ativação do AhR ocorre mediante interação com o translocador nuclear do AhR (ARNT), e pode ser reprimida através da competição com seu repressor (AhRR). Os genes Arnt e Ahrr estão contidos no intervalo de confiança de dois loci de suscetibilidade à artrite mapeados em camundongos selecionados fenotipicamente para alta (HIII) ou baixa (LIII) produção de anticorpos. Estas linhagens, quando submetidas ao modelo de artrite induzida por pristane (PIA), demonstram suscetibilidade extremamente divergente, possivelmente decorrente de suas genéticas distintas: completamente resistentes e suscetíveis, respectivamente. Elas também albergam microbiotas intestinais distintas, que podem ser parcialmente transferidas entre as linhagens, modulando os fenótipos de suscetibilidade à artrite. O envolvimento dos genes da via do AhR na progressão da artrite reumatoide ainda é pouco explorado, porém é pertinente investigar se os animais HIII e LIII apresentam alelos distintos destes genes, o que poderia sugerir um papel no desenvolvimento da doença, a ser avaliado em estudos posteriores. OBJETIVO: Investigar presença e distribuição de possíveis polimorfismos dos genes Arnt e Ahrr em camundongos HIII e LIII, e suas eventuais relevâncias na suscetibilidade à PIA. METODOLOGIA: RNA de camundongos das linhagens HIII e LIII foi convertido para cDNA por transcrição reversa. O material obtido foi amplificado por PCR com primers específicos para fragmentos dos genes alvo, e então submetido a eletroforese, com posterior purificação do DNA do gel ou do produto de PCR. Os produtos purificados foram então sequenciados. RESULTADOS: Para o Arnt, três de cinco fragmentos foram amplificados. Já para o Ahrr, apenas um de três fragmentos foi amplificado. As reações de sequenciamento realizadas indicaram uma divergência de uma base entre os animais HIII e LIII em um fragmento do Arnt, no entanto em uma sequência de baixa qualidade. DISCUSSÃO: Limitações intrínsecas aos genes, como baixa taxa de expressão e extensas UTRs 3’ de seus mRNAs, além de problemas técnicos que comprometeram o sequenciamento das extremidades dos fragmentos sequenciados, não permitiram concluir que a divergência encontrada seja um polimorfismo, e não um artefato de sequenciamento. CONCLUSÃO: A maior fragmentação da sequência a ser amplificada, ou ainda a clonagem de fragmentos do gene em plasmídeos para posterior sequenciamento poderiam superar os obstáculos encontrados no decorrer deste estudo, e indicam os próximos passos a serem seguidos na investigação do papel que a via do AhR exerce na suscetibilidade à PIA.

Camundongos como modelos de doenças hemostáticas

Mice initiated to be used for experimental purposes in laboratories in laboratories in the early 20 th century, simultaneously with the rediscover of Mendel’s Laws. Ever since, they are considered excellent models for genetic studies, as they have high biological similarity with humans -between 70 and 90%-, and have a genome easily handled by means of molecular techniques and breeding procedures. Furthermore, mice have a short gestation period, shorter life cycle in comparison to other animals and easy handling in laboratory facilities. Around the 1990s, genetically modified animals were produced as models for mimicking hemostatic diseases. These genetically modified animals showed hemostatic alterations characteristic of human diseases, as hemophilia A -caused by mutations in coagulation factor VIII-, hemophilia B -caused by mutations in coagulation factor IX- and von Willebrand disease -vWD- caused by mutations in von Willebrand factor-. In this context, the animal models of hemostatic disorders have become important tools for evaluating new treatments and studying rare disease conditions.

Os camundongos foram introduzidos nos laboratórios com fins experimentais no início do século XX juntamente com a redescoberta da Lei de Mendel. Desde então, são considerados excelentes modelos para o estudo de genética, por apresentarem alta similaridade biológica com o ser humano, compreendida entre 70 e 90% e um genoma facilmente manipulado por meio de técnicas moleculares e sistemas de acasalamentos. Além disso, os camundongos apresentam um período de gestação curto, seu ciclo de vida é menor se comparado a outros animais e são de fácil manuseio em laboratório. Por volta dos anos 1990, foi introduzida a utilização de animais geneticamente modificados como modelos para reprodução de doenças hemostáticas. Esses animais geneticamente modificados apresentavam alterações hemostáticas características de doenças humanas, como as hemofilias do tipo A -causada por mutações no fator VIII da coagulação-, hemofilia do tipo B -causada por mutações no fator IX da coagulação- e doença de von Willebrand -vWD- causada por mutações no fator de von Willebrand -vWF-. Os modelos de animais com distúrbios hemostáticos se tornaram importantes ferramentas para testar novas formas de tratamento e estudar condições raras das doenças.

Análise comparativa do reparo alveolar em camundongos fêmeas C57BL/6 em falência ovariana provocada pela senescência, induzida quimicamente ou por ovariectomia / Comparative analysis of alveolar repair in female C57BL/6 mice in ovarian failure caused by senescence, chemically induced or by ovariectomy

Diferentes modelos animais são utilizados para investigação do metabolismo e reparo ósseo pós-menopausa, resultando em diferentes impactos na produção dos hormônios ovarianos. O presente trabalho analisou e comparou o processo de reparo ósseo intramembranoso após a extração dentária de camundongos fêmeas em condição de estropausa fisiológica, induzida quimicamente e por ovariectomia, bem como os níveis séricos de marcadores ósseos e de estresse oxidativo. Foram utilizados 46 camundongos fêmeas C57BL/6J, com idades iniciais entre 4, 6 e 18 meses, pesando cerca de 25 - 28 gramas, as quais constituíram cinco grupos: CT ­ animas que não receberam nenhum tratamento (6 meses), SHAM ­ ovariectomia fictícia (4 meses), OVX ­ submetidas a ovariectomia (4 meses), VCD ­ medicadas com diepóxido 4-vinilciclohexeno (VCD) (4 meses) na dose de 160 mg/Kg/dia, via IP por 20 dias consecutivos e ID ­ em período pós-estropausa fisiológica (18 meses). Constatada a condição de diestro persistente nos animais de todos os grupos, os mesmos foram submetidos a exodontia do incisivo superior direito para posterior eutanásia nos períodos de 7 e 21 dias, quando as maxilas contendo os alvéolos foram removidas para obtenção de lâminas histológicas coradas com HE, Tricrômico de Goldner e para a técnica imuno-histoquímica para as proteínas RANKL e OPG. O sangue também foi coletado para as análises bioquímicas para dosagem dos níveis de cálcio, fosfato, fosfatase alcalina (FAL) e TRAP total, bem como para capacidade antioxidante total e TBARs. A análise histopatológica revelou que todos os alvéolos repararam aos 21 dias; porém, com diferenças nos aspectos histomorfológicos entre os grupos. Os grupos Controle e SHAM apresentaram trabeculado ósseo regular e em remodelação com moderada marcação para RANKL e OPG. Já os grupos OVX e Idosa apresentaram trabéculas ósseas irregulares e delgadas desde o dia 7, as quais mostravam-se pouco celularizadas aos 21 dias. O grupo VCD exibiu neoformação mais discreta aos 7 dias, porém, com tecido ósseo em franca remodelação aos 21 dias. Apesar destas diferenças, notou-se moderada marcação para RANKL e OPG nestes grupos, com destaque para o infiltrado inflamatório mononuclear. Os níveis séricos de TRAP e FAL estavam significativamente aumentados no grupo Idosa aos 21 dias em comparação com os demais grupos, bem como a capacidade antioxidante total. Não foram observadas diferenças estatísticas nos níveis de cálcio e fosfato, e em TBARs. A partir dos resultados obtidos pode-se concluir que os diferentes modelos de falência ovariana, fisiológica ou precoce, interferem de modo distinto no reparo ósseo alveolar pós-exodontia, bem como nos níveis séricos nos marcadores de remodelação óssea e de capacidade antioxidante, devendo ser considerados no momento da seleção do modelo e correlação com os achados clínicos em humanos(AU)

Different animal models are used to investigate postmenopausal metabolism and bone repair, resulting in different impacts on ovarian hormone production. The present work analyzed and compared the intramembranous bone repair process after tooth extraction in female mice in physiological stropause, chemically induced and by ovariectomy, as well as the serum levels of bone markers and oxidative stress. Fortysix C57BL/6J female mice were used, with initial ages between 4, 6 and 18 months, weighing about 25 - 28 grams, which constituted five groups: CT - animals that did not receive any treatment (6 months), SHAM - ovariectomy dummy (4 months), OVX ­ submitted to ovariectomy (4 months), VCD ­ medicated with 4-vinylcyclohexene diepoxide (VCD) (4 months) at a dose of 160 mg/kg/day, via IP for 20 consecutive days and ID ­ in the physiological post-estropause period (18 months). Once the condition of persistent diestrus was observed in the animals of all groups, they were submitted to extraction of the upper right incisor for later euthanasia in the periods of 7 and 21 days, when the jaws containing the alveoli were removed to obtain histological slides stained with HE, Goldner trichrome and for the immunohistochemical technique for RANKL and OPG proteins. Blood was also collected for biochemical analysis to measure calcium, phosphate, alkaline phosphatase (FAL) and total TRAP levels, as well as for total antioxidant capacity and TBARs. Histopathological analysis revealed that all alveoli repaired at 21 days; however, with differences in histomorphological aspects between the groups. The Control and SHAM groups showed regular bone trabeculation and remodeling with moderate staining for RANKL and OPG. On the other hand, the OVX and Elderly groups presented irregular and thin bone trabeculae from day 7, which showed little cellularization at day 21. The VCD group exhibited more discrete neoformation at 7 days, however, with bone tissue in clear remodeling at 21 days. Despite these differences, moderate staining for RANKL and OPG was observed in these groups, with emphasis on the mononuclear inflammatory infiltrate. The serum levels of TRAP and FAL were significantly increased in the Elderly group at 21 days compared to the other groups, as well as the total antioxidant capacity. No statistical differences were observed in calcium and phosphate levels, and in TBARs. From the results obtained, it can be concluded that the different models of ovarian failure, physiological or early, interfere differently in post-extraction alveolar bone repair, as well as in the serum levels of bone remodeling and antioxidant capacity markers, and should be considered at the time of model selection and correlation with clinical findings in humans(AU)

Papel do Receptor Lgr5 no Prognóstico e na Biologia de Sarcomas de Partes Moles / Role of the Lgr5 Receptor in the Prognosis and Biology of Soft Tissue Sarcomas

INTRODUÇÃO: Os sarcomas de partes moles (SPM) de alto grau são neoplasias heterogêneas, de prognóstico ruim e que apresentam poucas alternativas de tratamento. A identificação de marcadores de resposta tumoral ao tratamento, prognóstico, e até ao desenvolvimento de novas drogas, é uma busca incessante para um melhor tratamento dos sarcomas. Neste aspecto, o receptor Lgr5 tem um grande potencial em ser um novo alvo molecular, sendo um marcador de células-tronco das criptas intestinais e glândulas mamárias que também atua como um modulador negativo da sinalização da via Wnt/ß-catenina, uma das mais importantes na biologia de sarcomas emerge como um promissor candidato para estudos pré-clínicos, uma vez que já foi demonstrada sua importância em tumores do trato gastrointestinal. Para isso, os modelos de tumor de xenoenxerto derivado do paciente (PDX) representam uma plataforma valiosa para identificar novos biomarcadores e novos alvos, assim como o Lgr5 para avaliar a resposta à terapia e os mecanismos de resistência. OBJETIVO: Este estudo teve como objetivo estabelecer, caracterizar e testar a proteína Lgr5 através de ensaios in vitro e in vivo para desvendar a importância de Lgr5 na biologia de SPM e estabelecer uma estrutura integrada, convergente e translacional para o estudo deste tipo de tumor. MATERIAIS E MÉTODOS: Para a determinação da expressão de Lgr5 foi estabelecida duas coortes de estudo, uma retrospectiva oriunda do Registro Institucional de Sarcomas e uma prospectiva, onde foram convidados pacientes operados na Instituição com o intuito de gerar Patient-derived xenografts (PDX), um modelo-pré-clínico que possui a capacidade de manter as características moleculares dos tumores dos pacientes. Para isso, foram utilizados fragmentos implantados em camundongos imunossuprimidos para gerar esses modelos tumorais derivados de pacientes, além dos estudos funcionais in vitro utilizando linhagens de SPM para análise de perfil de expressão da proteína Lgr5 através de ensaios com imunofluorescência para verificar a capacidade de expressão de Lgr5, citometria de fluxo para verificar o padrão e quantidade de proteína nas amostras analisadas e western blotting para obter um padrão de marcação da proteína Lgr5. Além dos ensaios funcionais para avaliar a participação da proteína na proliferação, se a expressão da proteína interfere no poder migratório das células e tumores de SPM e capacidade de auto renovação, bem como sua associação com os dados clínicos e dados de sobrevida. RESULTADOS: O Registro Institucional retrospectivo conta com mais de 300 pacientes, já o Registro prospectivo com 70 pacientes que derivaram a geração de 33 PDX. Foi observado que pacientes com H-score superior a 20 apresentaram sobrevida global menor em 5 anos em comparação com o H-score de pacientes com valores inferiores a 20. Agora na outra análise feita, o H-score de pacientes com valores superiores a 25 é pior em comparação com os que apresentaram valores inferiores a 25 nos dados de sobrevida livre de doença. Além disso, células que superexpressam a proteína Lgr5 tem maior capacidade migratória (p= 0.02) e uma tendência de aumento na proliferação e auto renovação. Realizamos o teste de implante dessas populações positivas e negativas de Lgr5, separadas previamente por cell sorting. Para isso foram utilizados animais Balb/c Nude. Sugerindo que a expressão da proteína transduzida pode ser modulada por mecanismos compensatórios que precisam ser explorados. CONCLUSÃO: A construção do Registro Institucional de SPM é um grande passo para o melhor compreendimento da biologia dos Sarcomas, além da possibilidade de estudar novos alvos terapêuticos desse tumor raro, uma vez que os estudos e artigos científicos ainda são muito escassos. A geração dos modelos PDX também foi uma estratégia implantada muito bem executada com a geração de 33 PDX de diversos subtipos histológicos. Além da proteína Lgr5 induzir a migração celular a sua expressão está relacionada a um pior prognóstico, uma vez que, quanto maior a expressão de Lgr5 menor é a sobrevida global do paciente.

INTRODUCTION: High-grade soft tissue sarcomas (STS) are heterogeneous neoplasms with a poor prognosis and few treatment alternatives. The identification of tumor response markers to treatment, prognosis, and even the development of new drugs, is an incessant search for a better treatment of sarcomas. In this aspect, the Lgr5 receptor has great potential to be a new molecular target, being a marker of stem cells of the intestinal crypts and mammary glands that also acts as a negative modulator of the signaling of the Wnt/ß-catenin pathway, one of the most important in the biology of sarcomas emerges as a promising candidate for preclinical studies, since its importance in tumors of the gastrointestinal tract has already been demonstrated. To that end, patient-derived xenograft (PDX) tumor models represent a valuable platform to identify new biomarkers and new targets, as does Lgr5 to assess therapy response and resistance mechanisms. OBJECTIVE: This study aimed to establish, characterize, and test the Lgr5 protein through in vitro and in vivo assays to unravel the importance of Lgr5 in the biology of PMS and to establish an integrated, convergent and translational framework for the study of this type of tumor. MATERIALS AND METHODS: To determine the expression of Lgr5, two study cohorts were established, a retrospective one from the Institutional Registry of Sarcomas and a prospective one, in which patients operated on at the Institution were invited to generate Patient-derived xenografts (PDX), a pre-model -clinical that has the ability to maintain the molecular characteristics of patients' tumors. For this, fragments implanted in immunosuppressed mice were used to generate these tumor models derived from patients, in addition to in vitro functional studies using SPM strains to analyze the expression profile of the Lgr5 protein through immunofluorescence assays to verify the ability to express Lgr5, flow cytometry to verify the pattern and amount of protein in the analyzed samples and western blotting to obtain a pattern of labeling of the Lgr5 protein. In addition to functional assays to assess the protein's participation in proliferation, whether protein expression interferes with the migratory power of SPM cells and tumors and self-renewal capacity, as well as its association with clinical data and survival data. RESULTS: The Institutional Retrospective Registry has more than 300 patients, while the Prospective Registry has 70 patients who derived the generation of 33 PDX. It was observed that patients with an H-score greater than 20 had a lower overall survival at 5 years compared to the H-score of patients with values below 20. Now in the other analysis performed, the H-score of patients with values greater than 25 it is worse compared to those who had values less than 25 in the disease-free survival data. Furthermore, cells that overexpress the Lgr5 protein have greater migratory capacity (p=0.02) and a tendency to increase proliferation and self-renewal. We performed the implant test of these positive and negative populations of Lgr5, previously separated by cell sorting. For this, Balb/c Nude animals were used. Suggesting that the expression of the transduced protein can be modulated by compensatory mechanisms that need to be explored. CONCLUSION: The construction of the Institutional Registry of PMS is a big step towards a better understanding of the biology of Sarcomas, in addition to the possibility of studying new therapeutic targets for this rare tumor, since studies and scientific articles are still very scarce. The generation of PDX models was also an implemented strategy very well executed with the generation of 33 PDX of several histological subtypes. In addition to the Lgr5 protein inducing cell migration, its expression is related to a worse prognosis, since the higher the Lgr5 expression, the lower the overall survival of the patient

Nuocytes from mesenteric lymph node promote allergic responses in a mouse model / Nuócitos de linfonodo mesentérico promovem respostas alérgicas em um modelo de camundongo

Abstract Introduction: Nuocytes play an important role in Type 2 immunity. However, the contribution of ILC2s to allergic rhinitis remains to be clearly elucidated. Objective: To evaluate the role of nuocytes from mesenteric lymph node on allergic responses in mice. Methods: After intraperitoneal administration of interleukin IL-25 and IL-33 to wild-type and Il17br-/-Il1rl1-/- double-deficient mice, nuocytes were purified from the the nasal-associated lymphoid tissue and mesenteric lymph nodes. Then, we assessed productions of IL-5 and IL-13 in nuocytes' cultures. Finally, we adoptively transferred the mesenteric lymph node-derived nuocytes from wild-type and Il17br-/-Il1rl1-/- mice to the murine model of allergic rhinitis to evaluate their roles in nasal allergic responses. Results: We showed that nuocytes in the mesenteric lymph nodes of wild-type mice were upregulated after application of IL-25 and IL-33, and were induced to produce IL-5 and IL-13. Numbers of sneezing and nasal rubbing as well as eosinophils were all enhanced after the adoptive transfer of wild-type nuocytes. Concentrations of IL-5, IL-13, IL-25 and IL-33 in nasal lavage fluid of allergic mice were also increased. However, nuocytes fromIl17br-/-Il1rl1-/- mice did not increase sneezing and nasal rubbing and eosinophilia, and upregulate the above cytokines in the nasal lavage fluid. Conclusion: The findings demonstrate that nuocytes from the mesenteric lymph nodes of wildtype mice promote allergic responses in a mouse model.

Resumo Introdução: Os nuócitos desempenham um papel importante na imunidade do tipo 2. No entanto, a contribuição das interleucinas ILC2s na rinite alérgica ainda precisa ser elucidada. Objetivo: Avaliar o papel dos nuócitos de linfonodos mesentéricos nas respostas alérgicas em camundongos. Método: Após a administração intraperitoneal de interleucina (IL)-25 e IL-33 em camundongos do tipo selvagem e camundongos Il17br-/-Il1rl1-/- com deficiência dupla, os nuócitos foram purificados do tecido linfoide associado a mucosa nasal e linfonodos mesentéricos. Em seguida, avaliamos as produções de IL-5 e IL-13 em culturas de nuócitos. Finalmente, transferimos adotivamente os nuócitos derivados de linfonodos mesentéricos de camundongos do tipo selvagem e camundongos Il17br-/-Il1rl1-/- para o modelo murino de rinite alérgica para avaliar seu papel nas respostas alérgicas nasais. Resultados: Mostramos que os nuócitos nos linfonodos mesentéricos de camundongos do tipo selvagem estavam up-regulados após a aplicação de IL-25 e IL-33 e foram induzidos a produzir IL-5 e IL-13. Os espirros e friçcão nasal, bem como os eosinófilos, aumentaram após a transferência adotiva de nuócitos do tipo selvagem. As concentrações de IL-5, IL-13, IL-25 e IL-33 no líquido da lavagem nasal de camundongos alérgicos também estavam aumentadas. Entretanto, os nuócitos de camundongos Il17br-/-Il1rl1-/- não aumentaram os espirros e a friçcão nasal ou eosinofilia e up-regularam as citocinas acima no líquido de lavagem nasal. Conclusão: Os achados demonstram que os nuócitos dos linfonodos mesentéricos de camundongos selvagens promovem respostas alérgicas em um modelo de camundongo.

Immunogenicity of Streptococcus equi subsp. equi recombinant SeM protein and bacterin in mice

ABSTRACT: The infection caused by Streptococcus equi, known as strangles, affects the respiratory system of horses, causing high morbidity and rapid spread among the herd. Bacterin vaccines, composed of inactivated whole cells of S. equi, have variable efficacy and duration. Infected animals produce specific antibodies against SeM, the immunodominant antigen of S. equi. This makes it a promising target for vaccine development. In this context, the objective of this work was to evaluate a vaccine combining S. equi bacterin and recombinant SeM protein. Mice were vaccinated with bacterin (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); rSeM protein (20g); bacterin-rSeM combination; or PBS (Control Group) and challenged with a suspension of S. equi, containing 10 × LD50. All vaccinated mice survived the challenge and produced anti-rSeM and anti-S. equi antibodies, which were assessed by indirect ELISA. The Control Group reached endpoint criteria 96 h after infection. These results demonstrate that a vaccine combining the S. equi bacterin with rSeM protein protects mice against strangles. This combination vaccine could potentially protect horses and overcome the limitations of currently available strangle vaccines.

RESUMO: A infecção causada por Streptococcus equi, denominada adenite, atinge o sistema respiratório de equinos, causando alta morbidade e rápida disseminação entre o rebanho. Vacinas bacterinas, compostas de células inteiras inativadas de S. equi apresentam eficácia e duração variáveis. Animais infectados apresentam anticorpos específicos à proteína SeM, antígeno imunodominante de S. equi, o que a torna um alvo promissor para o desenvolvimento de vacinas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar uma vacina baseada na administração simultânea da bacterina e da proteína SeM recombinante. Camundongos foram vacinados com a bacterina (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); a proteína rSeM (20g); a bacterina e rSeM simultaneamente; ou PBS (Grupo Controle) e, posteriormente, foram desafiados com uma suspensão de S. equi contendo 10 × LD50. Todos os animais vacinados apresentaram anticorpos anti-rSeM e contra S. equi, avaliados através de ELISA indireto, e mantiveram-se e sobreviveram ao desafio letal. O Grupo Controle atingiu critérios de endpoint 96 h após a infecção. Estes resultados demonstram que uma vacina constituída de células inteiras de S. equi com rSeM protege camundongos contra adenite, sugerindo a capacidade de proteção a equinos e, possivelmente, superando as limitações das vacinas contra adenite atualmente disponíveis.

Immunogenicity of Streptococcus equi subsp. equi recombinant SeM protein and bacterin in mice / Imunogenicidade da proteína recombinante SeM de Streptococcus equi subsp. equi e da bacterina em camundongos

The infection caused by Streptococcus equi, known as strangles, affects the respiratory system of horses, causing high morbidity and rapid spread among the herd. Bacterin vaccines, composed of inactivated whole cells of S. equi, have variable efficacy and duration. Infected animals produce specific antibodies against SeM, the immunodominant antigen of S. equi. This makes it a promising target for vaccine development. In this context, the objective of this work was to evaluate a vaccine combining S. equi bacterin and recombinant SeM protein. Mice were vaccinated with bacterin (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); rSeM protein (20μg); bacterin-rSeM combination; or PBS (Control Group) and challenged with a suspension of S. equi, containing 10 × LD50. All vaccinated mice survived the challenge and produced anti-rSeM and anti-S. equi antibodies, which were assessed by indirect ELISA. The Control Group reached endpoint criteria 96 h after infection. These results demonstrate that a vaccine combining the S. equi bacterin with rSeM protein protects mice against strangles. This combination vaccine could potentially protect horses and overcome the limitations of currently available strangle vaccines.(AU)

A infecção causada por Streptococcus equi, denominada adenite, atinge o sistema respiratório de equinos, causando alta morbidade e rápida disseminação entre o rebanho. Vacinas bacterinas, compostas de células inteiras inativadas de S. equi apresentam eficácia e duração variáveis. Animais infectados apresentam anticorpos específicos à proteína SeM, antígeno imunodominante de S. equi, o que a torna um alvo promissor para o desenvolvimento de vacinas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar uma vacina baseada na administração simultânea da bacterina e da proteína SeM recombinante. Camundongos foram vacinados com a bacterina (S. equi ~1.2 × 108CFU/ml); a proteína rSeM (20μg); a bacterina e rSeM simultaneamente; ou PBS (Grupo Controle) e, posteriormente, foram desafiados com uma suspensão de S. equi contendo 10 × LD50. Todos os animais vacinados apresentaram anticorpos anti-rSeM e contra S. equi, avaliados através de ELISA indireto, e mantiveram-se e sobreviveram ao desafio letal. O Grupo Controle atingiu critérios de endpoint 96 h após a infecção. Estes resultados demonstram que uma vacina constituída de células inteiras de S. equi com rSeM protege camundongos contra adenite, sugerindo a capacidade de proteção a equinos e, possivelmente, superando as limitações das vacinas contra adenite atualmente disponíveis.(AU)

Study of muscle fibers of the extensor digitorium longus and soleus muscles of C57BL/6 females exposed to glyphosate during pregnancy and lactation / Estudo das fibras musculares dos músculos extensor longo dos dedos e sóleo de fêmeas C57BL/6 expostas ao glifosato durante a prenhez e a lactação

ABSTRACT Objective To evaluate the morphology and morphometry of the muscles extensor digitorium longus and soleus of C57BL/6 females, who were exposed to glyphosate during pregnancy and lactation. Methods Twelve female mice from the C57BL/6 lineage were used. After detection of pregnancy, they were divided into a Control Group, which received only water, and a Glyphosate Group, which received water with 0.5% glyphosate during pregnancy and lactation. Both groups received ad libitum standard diet. After weaning, the females were euthanized and weighed; naso-anal length was measured, and fats were collected and weighed. The muscles extensor digitorium longus and soleus were collected, and their length and weight were measured. Then, the muscles were fixed in Methacarn to perform the histological study of muscle fibers. Results Glyphosate Group presented lower weight gain during pregnancy and also lower final body weight and naso-anal length; however, the other body parameters evaluated did not present a significant difference in relation to the Control Group. Significant differences were also not observed in the analysis of muscle fibers and connective tissue. Conclusion Exposure to 0.5% glyphosate during pregnancy and lactation resulted in lower weight gain during pregnancy, final weight, and naso-anal length. Despite not directly altering the morphology of muscle tissue, these results may indicate enough exposure to interfere with animal metabolism.

RESUMO Objetivo Avaliar a morfologia e a morfometria dos músculos extensor longo dos dedos e sóleo de fêmeas C57BL/6 expostas ao glifosato durante a prenhez e lactação. Métodos Foram utilizados 12 camundongos fêmeas da linhagem C57BL/6. Após detecção da prenhez, foram separadas em Grupo Controle, que recebeu somente água, e Grupo Glifosato, que recebeu água com 0,5% de glifosato durante a prenhez e lactação. Ambos os grupos receberam dieta padrão ad libitum. Após o desmame, as fêmeas foram eutanasiadas e pesadas; o comprimento nasoanal foi mensurado, e as gorduras foram coletadas e pesadas. Os músculos extensor longo dos dedos e sóleo foram coletados, e seu comprimento e peso foram mensurados. Em seguida, os músculos foram fixados em Methacarn para a realização do estudo histológico das fibras musculares. Resultados O Grupo Glifosato apresentou menor ganho de peso durante a prenhez e também menor peso corporal final e comprimento nasoanal, entretanto os demais parâmetros corporais avaliados não apresentaram diferença significativa em relação ao Grupo Controle. Na análise das fibras musculares e do tecido conjuntivo, também não foram observadas diferenças significativas. Conclusão A exposição a 0,5% de glifosato durante a prenhez e lactação resultou em menor ganho de peso na gestação, peso final e comprimento nasoanal, o que pode indicar que, apesar de não alterar a morfologia do tecido muscular diretamente, a exposição foi suficiente para interferir no metabolismo dos animais.

Efeito tempo-dose-resposta do montelucaste no processo de reparo alveolar em camundongos 129Sv/Ev / Time-dose-response effect of Montelukast in the process of alveolar repair in 129Sv / Ev mice

Metabólitos do ácido araquidônico são conhecidos por exercerem importante papel nos processos inflamatórios e no metabolismo do tecido ósseo. No entanto, as ações pontuais, especialmente dos leucotrienos derivados da 5-lipoxigenase (5-LO) sobre o processo de reparo ósseo intramembranoso são pouco exploradas. O presente estudo tem como objetivo analisar os efeitos tempo-dose-resposta da droga montelucaste (MTK), potente antagonista dos receptores de cisteinil leucotrienos tipo 1 (CisLT1Rs), no curso do reparo alveolar pós-exodontia em camundongos 129Sv/Ev, bem como nos níveis plasmáticos de marcadores ósseos bioquímicos. Para tanto, foram utilizados 70 camundongos machos jovens divididos em quatro grupos, de acordo com o tratamento: C - Grupo Controle (não tratados); CV - Grupo Controle Veículo, 20 µL de solução fisiológica (SF) 0,9%; MTK2 ­2 mg/kg de MTK e MTK4 ­ 4 mg/kg de MTK. Os animais dos grupos CV, MTK2 e MTK4 foram tratados diariamente por via oral, iniciando 24 horas antes do procedimento cirúrgico, continuando até o final dos períodos experimentais de 7, 14 e 21 dias pós-operatórios. Ao final dos períodos determinados, os animais foram submetidos à eutanásia para coleta de sangue para análise bioquímica dos níveis de cálcio, fosfato, fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) total e fosfatase alcalina (FAL), coleta da maxila direita contendo os alvéolos dentários para serem analisados por meio de microtomografia computadorizada (microCT), e análise histopatológica. Os resultados obtidos foram submetidos à testes estatísticos considerando-se nível de confiança de 5%. Observou-se aumento do BV/TV para os animais tratados com MTK em relação aos grupos C e CV, tanto aos 14 dias quanto aos 21 dias, sendo maior no grupo MTK4 aos 14 dias em relação ao grupo MTK2. Do mesmo modo, os animais tratados com MTK em ambas doses apresentaram aumento significativo de Tb.Th em comparação aos grupos C e CV aos 21 dias. Chamou a atenção valores de BV/TV e Tb.Th significativamente reduzidos no grupo CV em comparação ao C, indicando um efeito negativo da manipulação do animal. Na análise histopatológica observou-se reparo ósseo precoce nos animais MTK2 e MTK4 em todos os períodos avaliados, em comparação aos do grupo C, bem como atraso no processo de reparo no grupo CV aos 21 dias. Quanto aos marcadores plasmáticos, observou-se aumento do cálcio no grupo MTK4 em relação ao grupo C aos 7 dias, e aos 21 dias também em relação ao grupo MTK2. Já o fosfato mostrouse significantemente elevado nos períodos de 7 e 21 dias no grupo MTK2 em relação aos demais grupos. FAL e TRAP total não apresentaram níveis plasmáticos significativamente diferentes comparando-se os grupos e períodos. Considerando os resultados obtidos, concluiu-se que o MTK exerceu efeito tempo-dose-dependente, acelerando o processo de reparo ósseo intramembranoso alveolar e interferindo nos níveis plasmáticos de cálcio e fosfato no presente modelo animal(AU)

Arachidonic acid metabolites are known to play an important role in inflammatory processes and in bone metabolism. However, the role of these products on alveolar bone repair post tooth extraction remains to be explored, especially leukotrienes, derived from 5-lipoxygenase (5-LO). The present study aims to analyze the time-doseresponse effects of the drug montelukast (MTK), a potent type 1 leukotriene cystenyl antagonist (CisLT1Rs), in the alveolar repair process after extraction in male 129Sv/Ev mice. For this purpose, 70 young male mice were used, divided into four groups: C - Control Group (no treatment); VC - Vehicle Control Group, treated with 20 µL of 0.9% SF; MTK2 - treated with 2mg / Kg of MTK and MTK4 - treated with 4mg / Kg of MTK. The animals of the CV, MTK2 and MTK4 groups were treated daily orally (V.O.), starting 24 hours before the surgical procedure, continuing until the end of the experimental periods of 7, 14 and 21 days postoperatively. At the end of the experimental periods, the animals were euthanized for blood collection for serum markers as calcium, phosphate, tartrate-resistant acid phosphate (TRAP) and alkaline phosphatasis (FAL), and to removal of the right maxilla containing the dental socket to be analyzed under computed microtomography (microCT) and histopathology. The results obtained were subjected to statistical tests considering a confidence level of 5%. Results revealed an increase in BV/TV for MTK vs. C and CV groups, in both 14 and 21 days time points. Of note, this increase was higher in MTK4 than in the MTK2 at 14 days. Considering Tb.Th, both MTK2 e MTK4 groups presented positive effects in the BV/TV and Tb.Th increase when compared to controls groups (C and CV) at 21 days. A decrease in BV/TV and Tb.Th was observed in CV compared to C, as a negative effect of animal manipulation. As observed in H&E sections, both MTK2 and MTK4 experimental groups presented an early bone repair in comparison with C group from 7 to 21 days. CV group presented a slight delayed bone healing compared to C. Levels of calcium was increased in MTK4 in comparison to C and MTK2 at 7 and 21 days. Phosphate was significantly elevated at 7 and 21 days in MTK2 in comparison to the other groups. Despite of beneficial effects on observed on morphological levels on sites of healing (microCT and HE), no significant changes were found for bone markers of remodeling in blood plasma (FAL and TRAP). Taken together, these results indicate that MTK induced early bone healing post tooth extraction in 129Sv/Ev mice. Thus, the inhibition of CysLT is suggested to exert a positive influence on intramembranous bone repair post tooth extraction(AU)

Evaluation of chemopreventive and chemotherapeutic effect of Artemisia vulgaris extract against diethylnitrosamine induced hepatocellular carcinogenesis in Balb C mice / Avaliação dos efeitos quimiopreventivo e quimioterápico do extrato de Artemisia vulgaris contra carcinogênese hepatocelular induzida por dietilnitrosamina em camundongos Balb C

The main objective of current study was to investigate the chemopreventive and chemotherapeutic activity of Artemisia vulgaris extract on diethylnitrosoamine induced hepatocarcinogenesis in Balb C mice. Diethylnitrosoamine (DEN: 0.9%) was prepared to induce hepatocarcinoma in Balb C mice. The extract Artemisia vulgaris (AV) was prepared by maceration technique. Mice were classified into four groups as follows: Group 1 a control group (N=7) received saline solution (3.5 l/mg), group 2 (N=14) received diethylnitrosoamine (3.5 l/mg) intraperitoneally once in a week for eight consecutive weeks, group 3 (N=7) received only plant extract (AV: 150 mg/kg (Body weight) once in a week, while group 4 (N=7) was given in combination of diethylnitrosoamine (3.5 l/mg) and plant extract (AV: 150 mg/kg (body weight). After eight weeks of DEN administration, mice of group 2 were divided into two subgroups containing seven mice each; subgroup 1 was sacrificed while subgroup 2 was treated with plant extract only (150 mg/kg (body weight)) once in a week for eight consecutive weeks. The DEN injected mice significant decline in levels of albumin with concomitant significant elevations such as aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, lactate dehydrogenase, alpha feto protein, gamma glutamyl transferase, 5 nucleotidase, glucose-6-phosphate dehydrogenase and bilirubin. The administration of A. vulgaris significantly decreased the DEN induced hepatotoxicity. Present study revealed the potential anti-cancerous nature of Artemisia vulgaris, both in case of chemopreventive and post-treatment of A. vulgaris. Further studies are needed to explore the mechanism of prevention and therapy.

O objetivo principal do presente estudo foi investigar as atividades quimiopreventiva e quimioterápica do extrato de Artemisia vulgaris em hepatocarcinogênese induzida por dietilnitrosoamina (DEN) em camundongos Balb C. Dietilnitrosoamina (DEN: 0,9%) foi preparada para induzir hepatocarcinoma em camundongos da linhagem Balb C. O extrato de A. vulgaris (AV) foi preparado pela técnica de maceração. Os camundongos foram classificados em quatro grupos conforme os seguintes: grupo 1, grupo controle (N=7) recebeu solução salina (3,5 µl/mg); grupo 2 (N=14) recebeu dietilnitrosoamina (3,5 µl/mg) por via intraperitoneal uma vez por semana durante oito semanas consecutivas; grupo 3 (N=7) recebeu apenas o extrato vegetal (AV: 150 mg/kg (peso corporal) uma vez por semana; enquanto no grupo 4 (N=7) foi administrado uma combinação de dietilnitrosoamina (3,5 l/mg) com extrato vegetal (AV: 150 mg/kg (peso corporal). Após oito semanas de administração de DEN, os camundongos do grupo 2 foram divididos em dois subgrupos, contendo sete camundongos cada um; no subgrupo 1, os animais foram sacrificados, enquanto no subgrupo 2, os animais foram tratados apenas com extrato vegetal (150 mg/kg (peso corporal)) uma vez por semana durante oito semanas consecutivas. Os camundongos nos quais foram injetados DEN apresentaram declínio significativo nos níveis de albumina, mas elevações significativas concomitantes de: aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase, lactato desidrogenase, alfa-fetoproteína, gama-glutamiltransferase, 5 nucleotidase, glicose-6-fosfato desidrogenase e bilirrubina. A administração de A. vulgaris diminuiu significativamente a hepatotoxicidade induzida pelo DEN. O presente estudo apresentou a potencialidade anticancerosa da A. vulgaris, tanto nos casos de quimioprevenção quanto no pós-tratamento da A. vulgaris. Mais estudos são necessários para explorar o mecanismo de prevenção e a terapia.

Evaluation of chemopreventive and chemotherapeutic effect of Artemisia vulgaris extract against diethylnitrosamine induced hepatocellular carcinogenesis in Balb C mice / Avaliação dos efeitos quimiopreventivo e quimioterápico do extrato de Artemisia vulgaris contra carcinogênese hepatocelular induzida por dietilnitrosamina em camundongos Balb C

Abstract The main objective of current study was to investigate the chemopreventive and chemotherapeutic activity of Artemisia vulgaris extract on diethylnitrosoamine induced hepatocarcinogenesis in Balb C mice. Diethylnitrosoamine (DEN: 0.9%) was prepared to induce hepatocarcinoma in Balb C mice. The extract Artemisia vulgaris (AV) was prepared by maceration technique. Mice were classified into four groups as follows: Group 1 a control group (N=7) received saline solution (3.5 μl/mg), group 2 (N=14) received diethylnitrosoamine (3.5 μl/mg) intraperitoneally once in a week for eight consecutive weeks, group 3 (N=7) received only plant extract (AV: 150 mg/kg (Body weight) once in a week, while group 4 (N=7) was given in combination of diethylnitrosoamine (3.5 μl/mg) and plant extract (AV: 150 mg/kg (body weight). After eight weeks of DEN administration, mice of group 2 were divided into two subgroups containing seven mice each; subgroup 1 was sacrificed while subgroup 2 was treated with plant extract only (150 mg/kg (body weight)) once in a week for eight consecutive weeks. The DEN injected mice significant decline in levels of albumin with concomitant significant elevations such as aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, lactate dehydrogenase, alpha feto protein, gamma glutamyl transferase, 5 nucleotidase, glucose-6-phosphate dehydrogenase and bilirubin. The administration of A. vulgaris significantly decreased the DEN induced hepatotoxicity. Present study revealed the potential anti-cancerous nature of Artemisia vulgaris, both in case of chemopreventive and post-treatment of A. vulgaris. Further studies are needed to explore the mechanism of prevention and therapy.

Resumo O objetivo principal do presente estudo foi investigar as atividades quimiopreventiva e quimioterápica do extrato de Artemisia vulgaris em hepatocarcinogênese induzida por dietilnitrosoamina (DEN) em camundongos Balb C. Dietilnitrosoamina (DEN: 0,9%) foi preparada para induzir hepatocarcinoma em camundongos da linhagem Balb C. O extrato de A. vulgaris (AV) foi preparado pela técnica de maceração. Os camundongos foram classificados em quatro grupos conforme os seguintes: grupo 1, grupo controle (N=7) recebeu solução salina (3,5 µl/mg); grupo 2 (N=14) recebeu dietilnitrosoamina (3,5 µl/mg) por via intraperitoneal uma vez por semana durante oito semanas consecutivas; grupo 3 (N=7) recebeu apenas o extrato vegetal (AV: 150 mg/kg (peso corporal) uma vez por semana; enquanto no grupo 4 (N=7) foi administrado uma combinação de dietilnitrosoamina (3,5 μl/mg) com extrato vegetal (AV: 150 mg/kg (peso corporal). Após oito semanas de administração de DEN, os camundongos do grupo 2 foram divididos em dois subgrupos, contendo sete camundongos cada um; no subgrupo 1, os animais foram sacrificados, enquanto no subgrupo 2, os animais foram tratados apenas com extrato vegetal (150 mg/kg (peso corporal)) uma vez por semana durante oito semanas consecutivas. Os camundongos nos quais foram injetados DEN apresentaram declínio significativo nos níveis de albumina, mas elevações significativas concomitantes de: aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase, lactato desidrogenase, alfa-fetoproteína, gama-glutamiltransferase, 5' nucleotidase, glicose-6-fosfato desidrogenase e bilirrubina. A administração de A. vulgaris diminuiu significativamente a hepatotoxicidade induzida pelo DEN. O presente estudo apresentou a potencialidade anticancerosa da A. vulgaris, tanto nos casos de quimioprevenção quanto no pós-tratamento da A. vulgaris. Mais estudos são necessários para explorar o mecanismo de prevenção e a terapia.

Toxoplasma gondii genotyping from free-range chickens (Gallus gallus domesticus) in a rural area of Rio Grande do Sul, Brazil / [Genotipagem de Toxoplasma gondii em galinhas domésticas em uma área rural do Rio Grande do Sul, Brasil]

Free-range chickens may ingest oocysts of T. gondii present in the environment and consequently harbor virulent strains of this parasite in different tissues, without any clinical signs. Isolation of T. gondii through bioassays on mice and cats from naturally infected chicken tissues has been described in several countries, demonstrating the importance of free-range chickens in the transmission of this parasite. The aim of this study was the genotypic characterization of T. gondii isolates obtained from naturally infected free-range chickens in a rural area of the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Brain and heart tissue from 12 chickens seropositive for T. gondii were processed using peptic digestion technique for parasite isolation. From 12 samples subjected to mouse bioassay, nine isolates were obtained. RFLP-PCR genotypic characterization was performed using 11 genetic markers: SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1 and Apico. Genetic characterization of the isolates revealed the presence of five atypical genotypes according to ToxoDB (# 11, # 55, # 64, # 140 and # 163). Our results showed a wide genetic diversity of T. gondii in free-range chickens in this region.(AU)

Galinhas criadas ao ar livre podem ingerir oocistos de T. gondii presentes no ambiente e, com isso, albergar cepas virulentas desse parasita em diferentes tecidos, sem sinais clínicos. O isolamento de T. gondii por meio de bioensaios em camundongos e gatos, a partir de tecidos de galinhas naturalmente infectadas, tem sido descrito em vários países. Isso demonstra a importância das galinhas caipiras na epidemiologia desse parasita. O objetivo deste trabalho foi caracterizar genotipicamente isolados de T. gondii obtidos de galinhas caipiras naturalmente infectadas em uma área rural do município de Santa Maria, estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Fragmentos de cérebro e de coração, de 12 galinhas soropositivas para T. gondii, foram processados pela técnica de digestão péptica para isolamento do parasita. Das 12 amostras submetidas a bioensaio com camundongos, nove isolados foram obtidos. A caracterização genotípica por RFLP-PCR foi realizada utilizando-se 11 marcadores genéticos: SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1 e Apico e revelou a presença de cinco genótipos atípicos de acordo com o ToxoDB (# 11, # 55, # 64, # 140 e # 163). Os resultados mostraram uma ampla diversidade genética de T. gondii em galinhas caipiras nessa região.(AU)

Effect of nabumetone on humoral immune responses in mice / Efeito da nabumetona nas respostas imunes humorais em camundongos

Nabumetone is used to reduce the pain and inflammation in rheumatoid arthritis. In the current study, immunomodulatory effect of Nabumetone is investigated in mice. The control group was administered normal saline orally as placebo. Nabumetone was administered orally via gavage in two treatment groups at 14mg/kg.b.w. doses and 28mg/kgb.w., respectively. Haemagglutination (HA) assay, Jerne hemolytic plaque and mice lethality assays were applied. In HA assay, the titer was significantly decreased in Nabumetone treatment groups (P< 0.001). In Jerne hemolytic plaque formation assay, there was a significant reduction (P< 0.001) in number of plaques in Nabumetone treated groups when compared with control. In mice lethality assay, there was a significant difference in mortality ratio of mice in control and Nabumetone treated groups (P< 0.001). Therefore, it is concluded that Nabumetone suppresses the humoral immune response in mice.(AU)

A nabumetona é usada na redução da dor e inflamação da artrite reumática. No presente estudo, o efeito imunomodulador é investigado em camundongos. O grupo de controle recebeu solução salina via oral como placebo. Nabumetona foi administrada oralmente via gavagem em dois grupos de tratamentos com doses de 14mg/kg.b.w. e 28mg/kgb.w., respectivamente. Foram realizados ensaios de hemaglutinação (HA), placa hemolítica de Jerne e letalidade dos camundongos. No ensaio HA, o grau foi significativamente menor nos grupos de tratamento com nabumetoma (P< 0.001). No ensaio de formação de placa hemolítica de Jerne houve redução significativa (P< 0.001) no número de placas em grupos tratados com nabumetoma comparado ao controle. No ensaio de letalidade dos camundongos houve diferença significativa no grau de mortalidade de camundongos no grupo de controle e grupos tratados com nabumetoma (P< 0.001). Portanto, conclui-se que a Nabumetoma suprime a resposta imune humoral em camundongos.(AU)

Avaliação dos Efeitos Cardíacos de Lectina Solúvel em Água (WSMoL) de Sementes de Moringa Oleifera / Evaluation of the Cardiac Effects of a Water-Soluble Lectin (Wsmol) from Moringa Oleifera Seeds

Resumo Fundsamento As sementes de Moringa oleifera , que são utilizadas para clarificação de água, contêm uma lectina chamada WSMoL que tem mostrado atividade antibacteriana e imunomoduladora in vitro . Devido ao seu valor nutritivo e potencial terapêutico, as folhas e as sementes dessa árvore são consumidas em algumas comunidades. Algumas lectinas de plantas não são tóxicas para mamíferos, mas tem sido relatado que outras são prejudiciais quando ingeridas ou administradas por outros meios. Objetivo Como um dos passos necessários para determinar a segurança de WSMoL, nós avaliamos os possíveis efeitos cardiotóxicos desta proteína purificada. Métodos Durante 21 dias consecutivos, a WSMoL foi administrada a camundongos por gavagem. Foram investigadas as funções eletrofisiológicas, mecânicas e metabólicas in vivo e ex vivo por meio de registros eletrocardiográficos, ressonância magnética nuclear e respirometria de alta resolução. Resultados O tratamento com WSMoL não induziu alterações nos níveis de glicose no sangue ou peso corporal em comparação com o grupo controle. Adicionalmente, as relações peso cardíaco/peso corporal e peso cardíaco/comprimento tibial estavam semelhantes em ambos os grupos. A ingestão de lectina também não modificou a tolerância à glicose ou resistência à insulina. Não foram observadas alterações nos parâmetros eletrocardiográficos ou na duração do potencial de ação cardíaco. Os corações dos camundongos dos grupos controle e WSMoL mostraram função ventricular esquerda preservada. Além disso, a WSMoL não induziu alterações na função mitocondrial (em todos os casos, p > 0,05). Conclusões A administração de WSMoL demonstrou ter um perfil de segurança cardíaca. Estes resultados contribuem à avaliação de segurança do uso de sementes de M. oleifera para tratar água, visto que essa lectina está presente na preparação empregada por algumas populações com esse fim. (Arq Bras Cardiol. 2020; [online].ahead print, PP.0-0)

Abstract Background Moringa oleifera seeds, which are used for water clarification, contain a lectin named WSMoL which has shown in vitro antibacterial and immunomodulatory activity. Due to their nutritional value and therapeutic potential, the leaves and seeds of this tree are eaten in some communities. Some plant lectins are non-toxic to mammals, but others have been reported to be harmful when ingested or administered by other means. Objective As one of the steps needed to define the safety of WSMoL, we evaluated possible cardiotoxic effects of this purified protein. Methods: WSMoL was administered for 21 consecutive days to mice by gavage. Electrophysiological, mechanical, and metabolic cardiac functions were investigated by in vivo and ex vivo electrocardiographic recordings, nuclear magnetic resonance, and high-resolution respirometry. Results The treatment with WSMoL did not induce changes in blood glucose levels or body weight in comparison with control group. Moreover, the heart weight/body weight and heart weight/tibia length ratios were similar in both groups. Lectin ingestion also did not modify glucose tolerance or insulin resistance. No alterations were observed in electrocardiographic parameters or cardiac action potential duration. The heart of mice from the control and WSMoL groups showed preserved left ventricular function. Furthermore, WSMoL did not induce changes in mitochondrial function (in all cases, p > 0.05). Conclusions The administration of WSMoL demonstrated a cardiac safety profile. These results contribute to the safety evaluation of using M. oleifera seeds to treat water, since this lectin is present in the preparation employed by some populations to this end. (Arq Bras Cardiol. 2020; [online].ahead print, PP.0-0)

Influência da vitamina C na lipoperoxidação hepática e muscular de camundongos C57BL/6 submetidos à dieta de cafeteria / Influence of vitamin C on hepatic and muscular lipoperoxidation of C57BL / 6 mice conducted on the cafeteria diet

Analisar o efeito do tratamento com vitamina C sobre a lipoperoxidação hepática e muscular, assim como sobre parâmetros bioquímicos de camundongos C57BL/6 submetidos à dieta de cafeteria durante nove semanas. Dezessete camundongos da linhagem C57BL/6, com dois meses de idade foram alocados em três grupos: 1) Controle, 2) Cafeteria e 3) Cafeteria + Vitamina C. O ensaio biológico foi conduzido por nove semanas, os animais foram mantidos em jejum de doze horas, e depois de sacrificados, o sangue e os tecidos foram coletados para dosagens bioquímicas. A partir de amostras de fígado e músculo sóleo, foram quantificados os teores de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e de lipídeos totais. Os fígados dos camundongos alimentados com dieta de cafeteria tratados ou não com vitamina C apresentaram maiores teores de TBARS comparados aos controles (p<0,05). Já o teor de TBARS muscular foi maior nos camundongos do grupo Cafeteria + Vitamina C comparado àquele encontrado para os animais Cafeteria e Controle (p<0,05). As concentrações de colesterol hepático e muscular foram mais elevadas no grupo Cafeteria + Vitamina C comparadas às dos grupos Controle e Cafeteria (p<0,05). O tratamento com vitamina C aumentou a lipoperoxidação muscular, mas não influenciou esse parâmetro no fígado de camundongos C57BL/6 alimentados com dieta de cafeteria. Além disso, a vitamina C elevou a concentração de colesterol nos tecidos hepático e muscular, mas não alterou a glicemia e os lipídeos séricos dos animais após nove semanas de tratamento.(AU)

To analyze the effect of vitamin C treatment on hepatic and muscular lipoperoxidation, as well as on biochemical parameters of C57BL / 6 mice submitted to the cafeteria diet for nine weeks. Seventeen mice of the C57BL / 6 lineage, two months old, were allocated to three groups: 1) Control, 2) Cafeteria and 3) Cafeteria + Vitamin C. The biological assay was conducted for nine weeks, the animals were kept in fasting for 12 hours and after being sacrificed, blood and tissues were collected for biochemical dosages. From the samples of liver and muscle, the contents of thiobarbituric acid reactive species (TBARS) and total lipids were quantified. The livers of mice fed with a diet of coffee or not treated with vitamin C showed higher levels of TBARS compared to controls (p <0.05). The muscle TBARS content was higher in the mice of the Cafeteria + Vitamin C group compared to that found for the Cafeteria and Control animals (p <0.05). The concentrations of hepatic and muscular cholesterol were higher in the Cafeteria + Vitamin C group compared to the Control and Cafeteria groups (p <0.05). Treatment with vitamin C increased muscle lipoperoxidation, but did not influence this parameter in the liver of C57BL 6 mice fed with cafeteria diet. In addition, vitamin C increased cholesterol concentration in liver and muscle tissues, but did not change serum glycemia and serum lipids after nine weeks of treatment.(AU)

Pathogenic potential of Brucella ovis field isolates with different genotypic profile and protection provided by the vaccine strain B. ovis ΔabcBA against B. ovis field isolates in mice / Vacina viva atenuada Brucella ovis Δ abcBA encapsulada protege camundongos frente a desafios de B. ovis isoladas de campo

Brucella ovis causes economic and reproductive losses in sheep herds. The goal of this study was to characterize infection with B. ovis field isolates in a murine model, and to evaluate protection induced by the candidate vaccine strain B. ovis ΔabcBA in mice challenged with these field isolates. B. ovis field strains were able to colonize and cause lesions in the liver and spleen of infected mice. After an initial screening, two strains were selected for further characterization (B. ovis 94 AV and B. ovis 266 L). Both strains had in vitro growth kinetics that was similar to that of the reference strain B. ovis ATCC 25840. Vaccination with B. ovis ΔabcBA encapsulated with 1% alginate was protective against the challenge with field strains, with the following protection indexes: 0.751, 1.736, and 2.746, for mice challenged with B. ovis ATCC25840, B. ovis 94 AV, and B. ovis 266 L, respectively. In conclusion, these results demonstrated that B. ovis field strains were capable of infecting and inducing lesions in experimentally infected mice. The attenuated vaccine strain B. ovis ΔabcBA induced protection in mice challenged with different B. ovis field isolates, resulting in higher protection indexes against more pathogenic strains.(AU)

Brucella ovis é responsável por perdas econômicas e reprodutivas em rebanhos ovinos. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a infecção com as cepas isoladas de campo de B. ovis em modelo murino e avaliar a eficiência vacinal da mutante B. ovis ΔabcAB para proteção contra desafio com as cepas isoladas de campo. Foram utilizadas sete cepas isoladas de campo foram capazes de colonizar e provocar lesões no fígado e no baço de camundongos após sete dias pós-infecção. Após triagem, duas cepas foram selecionadas para a melhor caracterização (B. ovis 94 AV and B. ovis 266L). Ambas apresentaram crescimento em placa de cultivo semelhante ao da cepa de referência B. ovis ATCC 25840. A vacinação com a cepa de Brucella ovis ΔabcBA encapsulada com alginato a 1% foi capaz de proteger camundongos desafiados com as cepas isoladas de campo, com os seguintes índices de proteção: 0,751, 1,736 e 2,746, para camundongos desafiados com B. ovis ATCC 25840, B. ovis 94 AV e B. ovis 266 L, respectivamente. Estes resultados demonstraram que as cepas isoladas de campo de B. ovis são capazes de infectar e induzir lesão em camundongos experimentalmente infectados. O uso da cepa mutante atenuada B. ovis ΔabcBA para vacinação de fêmeas C57BL/6 desafiados com diferentes cepas de B. ovis induziu proteção nos camundongos desafiados com diferentes cepas de B. ovis. Deste modo, mostrando-se eficiente na proteção das cepas de campo de B. ovis.(AU)